影響凝膠色譜圖的重要因素 由實驗得到的凝膠色譜圖,再結(jié)合標(biāo)定線進(jìn)行分子量分布的計算。因而必須保持標(biāo)定色譜柱和測定試樣對實驗條件的一致性,否則將會引起譜圖的位置、形狀、寬度的變化導(dǎo)致計算結(jié)果的誤差。另外實驗條件本身選擇不合適也會影響色譜圖。
a .流速
目前,凝膠色譜實驗中,一般直接記錄譜圖的淋出體積(或保留時間)作為計算參數(shù)。流速的變化將直接影響譜圖的淋出體積,1%的流速變化會引起分子量的誤差達(dá)8%。因此,要求輸液泵流速穩(wěn)定在1%以內(nèi)。同樣,
記錄儀紙速恒定也很重要,需恒定在0.2%以內(nèi)。
b .進(jìn)樣濃度
凝膠色譜圖與進(jìn)樣濃度有關(guān),隨著進(jìn)樣濃度的增加,色譜圖后移,變寬甚至出現(xiàn)多峰。當(dāng)分子量愈大,溶劑愈良好,流速愈大,分布愈寬時,色譜圖的濃度依賴性表現(xiàn)愈明顯。一旦譜圖有了濃度依賴性,其后果是:所計算的分子量偏小,分布變寬、分離效率變差。因此配制高分子溶液時,在檢測器靈敏度允許范圍內(nèi)應(yīng)盡可能低。當(dāng)采用示差檢測器時,
濁度計|
色度計|
粘度計|
折射計|
滴定儀|
密度計|
熱流計|
濃度計|
折射儀|
采樣儀| 如高分子與溶劑的折光指數(shù)差很小,必須配制較高濃度才能得到足夠的信號,這時為了消除濃度對峰位的影響,可采用不同濃度進(jìn)樣,然后,以峰位對濃度作圖,求得外推濃度至零時的峰值。此法只適用于低分子量(M < 5×105),因為在高分子量高濃度時,峰值對濃度作圖為非線性的。
在凝膠色譜實驗中還有一個導(dǎo)致譜圖后移的是由大分子降解引起。當(dāng)大分子流經(jīng)色譜柱時由于剪切作用產(chǎn)生降解,它隨流速增加而增加,故是機(jī)械降解。影響降解的因素很多,當(dāng)分子量愈大、濃度愈高、溶劑性能愈差、色譜柱填料愈細(xì)、降解愈嚴(yán)重。為了消除色譜圖的濃度依賴性,有人曾采用θ溶劑,但從降解的角度來看是非常不利的。因此,對高分子量聚合物需綜合選擇實驗條件,盡可能選低濃度、低流速以確保結(jié)果的可靠。