保存時間漂移的幾種最常見的原因

保存時間漂移的幾種最常見的原因
保存時間不重現(xiàn)有兩種不同的情況：即保存時間漂移和保存時間波動。前者是指保存時間僅沿單方向發(fā)生變化，而后者指保存時間無固定規(guī)律的波動。將此兩種情況區(qū)分開來對找到題目的原因往往很有幫助。如，保存時間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保存時間的無規(guī)律波動。事實(shí)上，保存時間漂移的多半原因是不同機(jī)理的色譜柱老化，如固定相流失（例如通過水解），色譜柱污染（由樣品或活動相所致）等。保存時間漂移的幾種最常見的原因如下： 

    一色譜柱平衡

            假如我們觀察到保存時間漂移，首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用活動相完全平衡。通常平衡需要10-20個柱體積的活動相，但假如在活動相中加進(jìn)少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當(dāng)長的時間來平衡色譜柱。 酸堿度計(jì)| 電導(dǎo)計(jì)| 水分測定儀| 濁度計(jì)| 色度計(jì)| 粘度計(jì)| 折射計(jì)| 滴定儀| 密度計(jì)| 熱流計(jì)| 濃度計(jì)| 折射儀| 采樣儀| 

            活動相污染也可能是原因之一。溶于活動相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保存時間的漂移。應(yīng)留意：水是很輕易污染的活動相成分。

    二固定相穩(wěn)定性

           固定相的穩(wěn)定性都是有限的，即使在推薦的PH范圍內(nèi)使用，固定相也會慢慢水解。例如，硅膠基質(zhì)在pH4時水解穩(wěn)定性最好。水解速度與活動相類型和配體有關(guān)。雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體比單官能團(tuán)配體的鍵合相要穩(wěn)定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。

           經(jīng)常清洗色譜柱亦會加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。

    三色譜柱污染

            保存時間漂移的另一個常見原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾并吸附活動相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可以是：活動相本身，活動相容器，連接管、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊，以及樣品等。通常通過實(shí)驗(yàn)可判定污染的來源。

            樣品中假如存在色譜柱上保存很強(qiáng)的組分，就可能是使保存時間漂移的潛伏根源。這些根源通常是樣品基質(zhì)。如：配藥中的賦形劑，生化樣品（如血清）中的蛋白及類脂類化合物，食品樣品中的淀粉，環(huán)境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強(qiáng)保存組分具有較高的分子量，在此情況下，保存時間漂移的同時或其后會有反壓的增加�？梢酝ㄟ^使用固相提�。⊿PE）等樣品前處理方法來往除樣品基質(zhì)的影響。

            避免色譜柱污染最簡單的方法是防患于未然。相比之下，找到題目的所在并設(shè)計(jì)有效的清洗步驟以往除污染物要困難的多。廣州市駿凱電子科技有限公司通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑，但并非所有污染物都可以在活動相中溶解。如THF可往除反相色譜柱中的很多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO經(jīng)常用于往除反相色譜柱中的蛋白。
使用保護(hù)柱是個非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法。 

    四活動相組成

            活動相組成的緩慢變化也是保存時間漂移的常見原因。如活動相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用活動相等。

    五疏水坍塌

             當(dāng)小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近100%的水為活動相時，有時會發(fā)生分離忽然喪失及被分析物質(zhì)保存明顯降低或完全不保存的現(xiàn)象，這就是疏水坍塌。此現(xiàn)象是由活動相不浸潤固定相表面而致。拯救的辦法實(shí)現(xiàn)用含大量有機(jī)組分的活動相浸潤固定相，再用高水含量的活動相進(jìn)行平衡。由是色譜柱長期儲存也會發(fā)生此現(xiàn)象。使用內(nèi)嵌極性基團(tuán)的反相色譜柱（如Waters SymmetryShield RP色譜柱）或非端基封口的色譜柱（如Waters Resolve色譜柱）也可避免發(fā)生坍塌。