紫外可見分光光度計(jì)的常見故障和使用經(jīng)驗(yàn)
一.光源部分:
(1)故障:鎢燈不亮;
原因:鎢燈燈絲燒斷(此種原因幾率最高);
檢查:鎢燈兩端有工作電壓,但燈不亮;取下鎢燈用萬用表電阻檔檢測。
處置:更換新鎢燈;
(2)故障:鎢燈不亮;
原因:沒有點(diǎn)燈電壓;
檢查:保險(xiǎn)絲被熔斷;
處置:更換保險(xiǎn)絲,(如更換后再次燒斷則要檢查供電電路);
(3)故障:氘燈不亮;
原因:氘燈壽命到期(此種原因幾率最高);
檢查:燈絲電壓、陽極電壓均有,燈絲也可能未斷(可看到燈絲發(fā)紅);
處置:更換氘燈;
(4)故障:氘燈不亮;
原因:氘燈起輝電路故障;
檢查:氘燈在起輝的過程中,一般是燈絲先要預(yù)熱數(shù)秒鐘,然后燈的陽極與陰極間才可起輝放電,假如燈在起輝的開始瞬間燈內(nèi)閃動(dòng)一下或連續(xù)閃動(dòng),并且更換新的氘燈后依然如此,有可能是起輝電路有故障,燈電流調(diào)整用的大功率晶體管損壞的幾率最大。
處置:需要專業(yè)人士修理;
二.信號(hào)部分:
(1)故障:沒有任何檢測信號(hào)輸出;
原因:沒有任何光束照射到樣品室內(nèi);
檢查:將波長設(shè)定為530nm,狹縫盡量開到最寬檔位,在黑暗的環(huán)境下用一張白紙放在樣品室光窗出口處,觀察白紙上有無綠光斑影像;
處置:檢查光源鏡是否轉(zhuǎn)到位?雙光束儀器的切光電機(jī)是否轉(zhuǎn)動(dòng)了(耳朵可以聞聲電機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)的聲音)?
(2)故障:樣品室內(nèi)無任何物品的情況下,全波長范圍內(nèi)基線噪聲大;
原因:光源鏡位置不正確、石英窗表面被濺射上樣品;
檢查:觀察光源是否照射到進(jìn)射狹縫的中心?石英窗上有無污染物?
處置:重新調(diào)整光源鏡的位置,用乙醇清洗石英窗;
(3)故障:樣品室內(nèi)無任何物品的情況下,僅僅是紫外區(qū)的基線噪聲大;
原因:氘燈老化、光學(xué)系統(tǒng)的反光鏡表面劣化、濾光片出現(xiàn)結(jié)晶物;
檢查:可見區(qū)的基線較為平坦,斷電后打開儀器的單色器及上蓋,肉眼可以觀察到光柵、反光鏡表面有一層白色霧狀物覆蓋在上面;假如光學(xué)系統(tǒng)正常,最大的可能是氘燈老化,可以通過能量檢查或更換新燈方法加以判定;
處置:更換氘燈、用火棉膠粘取鏡面上的污物或用研磨膏研磨濾光片(留意:此種技巧需要有一定維修經(jīng)驗(yàn)者來實(shí)施);
(4)故障:樣品室放進(jìn)空缺后做基線記憶,噪聲較大,紫外區(qū)尤甚;
原因:比色皿表面或內(nèi)壁被污染、使用了玻璃比色皿或空缺樣品對(duì)紫外光譜的吸收太強(qiáng)烈,使放大器超出了校正范圍;
檢查:將波長設(shè)定為250nm,先在不放任何物品的狀態(tài)下調(diào)零,然后將空比色皿插進(jìn)樣品道一側(cè),此時(shí)吸光值應(yīng)小于0.07Abs;假如大于此值,有可能是比色皿不干凈或使用了玻璃比色皿;同樣方法也可判定空缺溶液的吸光值大;
處置:清洗比色皿,更換空缺溶液;
(5)故障:吸光值結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值(最常見);
原因:沒做空缺記憶、樣品的吸光值小于空缺參比液;
檢查:將參比液與樣品液調(diào)換位置便知;
處置:做空缺記憶、調(diào)換參比液或用參比液配置樣品溶液;
(6)故障:樣品信號(hào)重現(xiàn)性不良;
原因:排除儀器本身的原因外,最大的可能是樣品溶液不均勻所致;在簡易的單光束儀器中,樣品池架一般為推拉式的,有時(shí)重復(fù)推拉不在同一個(gè)位置上;
檢查:更換一種穩(wěn)定的試樣判定;
處置:采取正確的試樣配置手段;修理推拉式樣品架的定位碰珠;
(7)故障:做基線掃描或樣品掃描時(shí),基線或信號(hào)有一個(gè)大的負(fù)脈沖;
原因:掃描速度設(shè)置得過快,信號(hào)在讀取時(shí),誤將濾光片或光源鏡的切換當(dāng)做信號(hào)讀取了;
檢查:改變掃描速度;
(8)故障:做基線掃描或樣品掃描時(shí),基線或信號(hào)有一個(gè)長時(shí)間段的負(fù)值或滿屏大噪聲;
原因:濾光片飼服電機(jī)“失步”,造成檔位錯(cuò)位,國產(chǎn)電機(jī)尤甚;
檢查:重新開機(jī)有可能回復(fù),或打開單色器對(duì)照波長與濾光片的相對(duì)位置來檢查(留意:打開單色器時(shí)要保護(hù)檢測器不被強(qiáng)光刺激);
處置:更換飼服電機(jī);
(9)故障:樣品出峰位置不對(duì);
原因:波長傳動(dòng)機(jī)構(gòu)產(chǎn)生位移;
檢查:通過氘燈的656.1nm的特征譜線來判定波長是否正確;
處置:對(duì)于高檔儀器而言處理手段相對(duì)簡單,使用儀器固有的自動(dòng)校正功能即可;而對(duì)于相對(duì)簡單的儀器,這種調(diào)整則需要專業(yè)職員來進(jìn)行了;
(10)故障:信號(hào)的分辨率不夠,具體表現(xiàn)是:本應(yīng)疊加在某一大峰上的小峰無法觀察到;
原因:狹縫設(shè)置過窄而掃描速度過快,造成檢測器響應(yīng)速度跟不上,從而失往應(yīng)測到的信號(hào);按常理,一定的狹縫寬度要對(duì)應(yīng)一定范圍的掃描速度;或者狹縫設(shè)置得過寬,使儀器的分辨率下降,將小峰融合在大峰里了。
檢查:放慢掃描速度看一看或?qū)ⅹM縫設(shè)窄;
處置:將掃描速度、狹縫寬窄、時(shí)間常數(shù)三者擬合成一個(gè)最優(yōu)化的條件;
(11)故障:當(dāng)儀器波長固定在某個(gè)波長下時(shí),吸光值信號(hào)上下擺動(dòng),特別是丈量模式轉(zhuǎn)換為按鍵開關(guān)式的簡易儀器;
原因:開關(guān)觸點(diǎn)因長期氧化所致造成接觸不良;
檢查:用手加重氣力按琴鍵時(shí),吸光值隨之變化;
處置:用金屬活化劑清洗按鍵觸點(diǎn)即可;
(12)故障:儀器零點(diǎn)飄忽不定,主要反映在簡易儀器上;
原因:在簡易儀器中,零點(diǎn)往往是通過電位器來調(diào)整,這種電位器一般是炭膜電阻制作的,使用久了往往造成接觸不良;
處置:更換電位器; 測厚儀| 測速儀| 轉(zhuǎn)速表| 壓力表| 壓力計(jì)| 真空表| 硬度計(jì)| 探傷儀| 電子稱| 熱像儀| 頻閃儀|
使用經(jīng)驗(yàn)
1、幾乎所有的光譜分析儀器(如紫外可見分光光度計(jì)、原子吸收分光光度計(jì)、一些儀器光度檢測器)都是依據(jù)的朗伯-比耳定律。
2、很多藥品要求相對(duì)誤差在1%以內(nèi)。
3、若石英比色皿QC的配對(duì)誤差為0.1%T,則給使用者帶來的分析誤差(△A/A)為0.5%。若QC的配對(duì)誤差為0.5%,則分析誤差為3%。
4、檢驗(yàn)石英比色皿QC的配對(duì)誤差時(shí),QC中應(yīng)裝滿蒸餾水或溶劑。
5、用超聲波清洗比色皿時(shí),一般用20W的清洗玻璃儀器的超聲波清洗30分鐘,就能解決題目,但盡不能用大功率超聲波來清洗比色皿,會(huì)損壞比色皿,特別是對(duì)那些用黏結(jié)方法制作的比色皿。
6、分析測試時(shí),注進(jìn)比色皿的溶液不要太滿,一般到比色皿高度的2/3即可。
7、一般的光電檢測器如硅光電池、光電管、光電倍增管有疲憊效應(yīng),應(yīng)避免長時(shí)間照射、預(yù)熱時(shí),打開樣品室蓋,防止光電檢測器受光疲憊。
8、A.owen在1988年指出:“吸光度丈量的正確度,取決于儀器的SBW與試樣的自然帶寬NBW的比率。SBW/NBW≤0.1時(shí),吸光度正確度可高達(dá)99.5%。NBW≥20nm時(shí),2nm的SBW對(duì)于吸光度的正確度測試是足夠的,可滿足大約99%的日常應(yīng)用!
9、我國藥典規(guī)定,用于藥檢的紫外可見分光光度計(jì)的SBW一定要求≤2nm。
10、光譜帶寬以nm計(jì),狹縫寬度以mm計(jì)。
11、波長正確度在某種程度上,決定光度正確度。
12、噪聲限制紫外可見分光光度計(jì)對(duì)樣品分析濃度的下限,并直接影響儀器的信噪比。雜散光直接限制被分析測試樣品濃度的上限。
13、雜散光對(duì)參比光束和樣品光束的影響是相同的。
14、在要求較高的分析測試工作中,紫外可見分光光度計(jì)的雜散光應(yīng)優(yōu)于0.05%,這樣可保證儀器有較寬的線性動(dòng)態(tài)范圍。
15、W.slavin以為,雜散光通常在紫外區(qū)。實(shí)際測試時(shí),應(yīng)檢測整個(gè)光譜區(qū)的兩個(gè)端點(diǎn)的雜散光。
16、紫外可見分光光度計(jì)的光度噪聲與掃描速度有很大關(guān)系。一般來講,掃描速度快的紫外可見分光光度計(jì)的噪聲也大。
17、紫外可見分光光度計(jì)的基線平直度是指每個(gè)波長上的光速噪聲。測基線平直度時(shí),掃描速度用慢速。
18、紫外可見分光光度計(jì)的線性動(dòng)態(tài)范圍取決于儀器的雜散光與噪聲。
19、在常規(guī)分析中,對(duì)大多數(shù)試樣濃度大多取10~100ug/ml,相當(dāng)0.3~0.7Abs左右最佳。在試樣量答應(yīng)時(shí),試樣應(yīng)選擇靠近最佳吸光度值(0.434Abs)的濃度。
20、為了得到更好的光度正確度,在分析過程中,特別要留意選擇試樣的最大吸收峰處的波長作為測試波長。
21、選擇光譜帶寬的原則是,在一定的實(shí)驗(yàn)條件下,測試吸光度隨光譜帶寬的變換,以獲得最大吸光度值的光譜帶寬作為欲選擇的光譜帶寬。
22、判定被測試樣是否有光解現(xiàn)象,首先要看測試數(shù)據(jù)的變化規(guī)律,對(duì)同一個(gè)試樣多次丈量,看其吸光度值是否都是向同一個(gè)方向變化,假如是,就可能有光解現(xiàn)象。