薄層色譜掃描儀的基本用途

薄層色譜掃描儀的基本用途
薄層定量工作最初是通過(guò)目視法或測(cè)面積法，對(duì)薄層上分離的斑點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)品比較進(jìn)行含量估計(jì)，但由于方法粗糙，可引起很大誤差。后來(lái)將斑點(diǎn)定量收集后，結(jié)合比色法或紫外分光光度法等進(jìn)行定量，雖然準(zhǔn)確度有所提高，但操作復(fù)雜，工作效率低。因此多年來(lái)薄層色譜法只能停留在分離鑒定和半定量的水平。70 年代后各國(guó)學(xué)者結(jié)合薄層色譜法的特點(diǎn)相繼設(shè)計(jì)出各種型號(hào)的薄層色譜儀，使薄層定量工作進(jìn)入了儀器化、自動(dòng)化的階段，從而使薄層色譜法成為微量、快速定量分析的有力手段。薄層色譜掃描儀的主要用途有：
　　a ．定性-光譜測(cè)定
　　在薄層上被分離的斑點(diǎn)，除用Rf 值及斑點(diǎn)本身的顏色特征、熒光或與特殊顯色劑顯色后進(jìn)行該化合物的定性外，還可以用薄層色譜儀在波長(zhǎng)200～800nm 間進(jìn)行斑點(diǎn)的原位掃描，測(cè)得該化合物的吸收曲線及最大吸收，并與對(duì)照品比較從而對(duì)樣品中該成分進(jìn)一步確證。
　　b ．定量-色譜測(cè)定
　　被分離的物質(zhì)斑點(diǎn)在薄層掃描儀上用合適的測(cè)定參數(shù)進(jìn)行掃描，可得到斑點(diǎn)的面積值與已知量的對(duì)照品斑點(diǎn)的面積相比較，可以計(jì)算出樣品中被分離物質(zhì)的含量，有些薄層色譜儀可以自動(dòng)給出被測(cè)物質(zhì)的濃度或百分含量。
　　應(yīng)用薄層色譜儀定量的方法有：
　�。╝）外標(biāo)法
　　定量時(shí)同時(shí)在板上點(diǎn)上已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液�？煞譃�1 點(diǎn)法和2 點(diǎn)法，當(dāng)工作曲線是通過(guò)原點(diǎn)的直線時(shí)，選用一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品-一點(diǎn)法；當(dāng)工作曲線不通過(guò)原點(diǎn)時(shí)，選用兩種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品-二點(diǎn)法。兩種方法的校正不僅可以對(duì)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)，還可以對(duì)兩個(gè)或四個(gè)同樣量的標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)的測(cè)得值進(jìn)行平均后計(jì)算。下圖為外標(biāo)一點(diǎn)法和二點(diǎn)法的工作曲線。外標(biāo)法是薄層掃描時(shí)最常用的定量方法。

　�。╞）內(nèi)標(biāo)法
　　本法與外標(biāo)法的主要區(qū)別在于用內(nèi)標(biāo)法時(shí)面積累計(jì)值為被測(cè)樣品和內(nèi)標(biāo)物的面積之比，在被測(cè)溶液中加入一種在被測(cè)液中不存在的性質(zhì)與被測(cè)定物質(zhì)類(lèi)似又易與被測(cè)物很易分離的純物質(zhì)。因此內(nèi)標(biāo)物的選擇比較困難，所以外標(biāo)法是更為常用的定量方法。內(nèi)標(biāo)法也分為一點(diǎn)法與二點(diǎn)法，選擇哪一種方法的原則與外標(biāo)法相同。
　�。╟）歸一化法
　　因?yàn)榻M分的含量與其斑點(diǎn)面積成正比，對(duì)于含n 個(gè)組分的混合物中組分1 的含量應(yīng)服從下式：


　　組分1 的百分濃度等于它的斑點(diǎn)面積在總斑點(diǎn)面積中所占的百分比。當(dāng)然只有在被分析各組分的性質(zhì)差別較小以及斑點(diǎn)面積在線性范圍內(nèi)的情況下才適用。