固定化pH 梯度等電聚焦電泳及其裝置

固定化pH 梯度等電聚焦電泳及其裝置
a ．固定化pH 梯度等電聚焦電泳
　　固定化pH 梯度（immobilized pH gradients IPG）等電聚焦電泳通常是指采用商品名為immobiline ( LKB , Sweden）的化合物，制備pH 梯度電泳膠，進行等電聚焦電泳的方法。
　　immobilines 是一組酰胺衍生物，基本結(jié)構(gòu)為CH2＝CH?CO?NH?R。取代基R 可以是羧酸基或三級胺。在制膠時，將帶有不同取代基（具有不同的pK 值）的immobiline 隨需要加入，經(jīng)過聚合，梭基或氨基化學鍵合到聚合物上，從而形成一個由低到高的固定化pH 梯度。目前提供的immobiline 的pH 范圍可以從3 到10 ，可根據(jù)需要選用不同的immobilines，從而制備出從單體的最低pH 到最高pH 的不同pH 范圍的電泳膠。
　　與采用Ampholytes 作為載體兩性電解質(zhì)的等電聚焦電泳相比，這種固定化的pH 梯度膠可以將膠的pH 范圍做得很窄，從而對蛋白質(zhì)的分辨率大大提高。例如可將一個20 厘米長的膠的pH 范圍做到4.35～4.55，每厘米pH 差異達0 . 01 ，即被分離物質(zhì)的等電點相差在0 . 01 時，可獲得很好的分離。immobiline 固定化pH 梯度膠的另一個突出優(yōu)點是，通過鍵合形成的pH 梯度十分穩(wěn)定，即使在采用很窄的pH 范圍、分離很復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物而需要長時間電泳的情況下亦是如此。
b ．制膠裝置
　　采用immobiline 固定化pH 梯度等電聚焦電泳分離復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物，其關(guān)鍵是制備重現(xiàn)性好的理想的pH 梯度膠。下圖為制備IPG 膠的基本方法示意圖。


　　為了達到重現(xiàn)性好和理想的pH 梯度，設(shè)計了多種梯度膠的裝備，如下圖所示。



　　四種pH 梯度膠制備裝置的性能比較見下表。

　　固定化pH 梯度等電聚焦電泳的電泳儀同傳統(tǒng)的等電聚焦電泳，僅需要在電壓電流的控制上作調(diào)整。

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