生物芯片技術(shù)流程
生物芯片技術(shù)不僅能夠提供極為豐富的信息,而且使用芯片的流程也不復(fù)雜。主要包括四個基本要點(diǎn):芯片方陣的構(gòu)建、樣品的制備、生物分子反應(yīng)和信號的檢測及分析。首先是準(zhǔn)備好芯片和待檢測樣品。采用光導(dǎo)原位合成或微量點(diǎn)樣等方面,將大量生物大分子如核酸片段、多肽分子甚至組織切片、細(xì)胞等生物樣品有序地固化于支持物(如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝膠或尼龍膜等載體)的表面,組成密集二維分子排列,然后與已標(biāo)記的待測生物樣品中靶分子雜交。如果是檢測表達(dá)譜,就需要從待檢測樣品mRNA或者total RNA中制備cDNA探針,與芯征雜交;如果是SNP檢測,則需要從待檢測樣品GenomicDNA中通過PCR制備探針。芯片雜交屬于固-液相雜交,與常規(guī)的Southern雜交相似,經(jīng)過高嚴(yán)謹(jǐn)度的洗滌后進(jìn)行結(jié)果檢測。制作者需要根據(jù)探針標(biāo)記分子的種類和芯片的規(guī)格來選擇檢測方法。對于Macroarrayg 一類的膠膜芯片,可選擇同位素標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光法標(biāo)記,檢測時需要X光片壓片曝光-顯影-掃描記錄,再選用相應(yīng)的軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。條件較好的實(shí)驗(yàn)室也可以選用磷屏成像系統(tǒng)代替X光片,直接成像并進(jìn)行定量分析。通過比較芯片上相同位置上的基因(即同一基因)在不同樣品的雜交信號,就可以得到這一基因在不同樣品中的表達(dá)信息。對于Microarray一類的玻離片基芯片,通常使用的標(biāo)記方法是熒光標(biāo)記,通過特殊的芯片掃描儀掃描和相應(yīng)的軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
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