食物中鈣的測(cè)定方法
本標(biāo)準(zhǔn)參照采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO 6490/2－1983《動(dòng)物飼料——鈣含量測(cè)定——原子吸收分光光度法》。
1 主題內(nèi)容與適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用原子吸收分光光度法和滴定法測(cè)定食物中鈣。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種食物中鈣的測(cè)定。
第一篇 原子吸收分光光度法
2 原理
樣品經(jīng)濕消化后，導(dǎo)入原子吸收分光光度計(jì)中，經(jīng)火焰原子化后，吸收422.7nm的共振線，其吸收量與含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。
3 試劑
要求使用去離子水，優(yōu)級(jí)純?cè)噭?
3.1 鹽酸(GB 622)。
3.2 硝酸(GB 626)。
3.3 高氯酸(GB 623)。
3.4 混合酸消化液：硝酸與高氯酸比為4∶1。
3.5 0.5N硝酸溶液：量取45mL硝酸，加去離子水并稀釋至1000mL。
3.6 2%氧化鑭溶液：稱取25g氧化鑭(純度大于99.99%)，加75mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度。
3.7 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取1.2486g碳酸鈣(純度大于99.99%)，加50mL去離子水，加鹽酸溶解，移入1000mL容量瓶中，加2%氧化鑭稀釋至刻度。貯存于聚乙烯瓶?jī)?nèi)，4℃保存。此溶液每毫升相當(dāng)于500μg鈣。
3.8 鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液：鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制見表1。
表1 鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液配制
鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液配制后，貯存于聚乙烯瓶?jī)?nèi)，4℃保存。
4 儀器與設(shè)備
所用玻璃儀器均以硫酸－重鉻酸鉀洗液浸泡數(shù)小時(shí)，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反復(fù)沖洗，最后用去離子水沖洗曬干或烘干，方可使用。
4.1 實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。
4.2 原子吸收分光光度計(jì)。
5 操作步驟
5.1 樣品處理
5.1.1 樣品制備
微量元素分析的樣品制備過程中應(yīng)特別注意防止各種污染。所用設(shè)備如電磨、絞肉機(jī)、勻漿器、打碎機(jī)等必須是不銹鋼制品。所用容器必須使用玻璃或聚乙烯制品，做鈣測(cè)定的樣品不得用石磨研碎。濕樣(如蔬菜、水果、鮮魚、鮮肉等)用水沖洗干凈后，要用去離子水充分洗凈。干粉類樣品(如面粉、奶粉等)取樣后立即裝容器密封保存，防止空氣中的灰塵和水分污染。
5.1.2 樣品消化
精確稱取均勻樣品干樣0.5～1.5g(濕樣2.0～4.0g，飲料等液體樣品5.0～10.0g)于250mL高型燒杯，加混合酸消化液20～30mL，上蓋表皿。置于電熱板或電沙浴上加熱消化。如未消化好而酸液過少時(shí)，再補(bǔ)加幾毫升混合酸消化液，繼續(xù)加熱消化，直至無(wú)色透明為止。加幾毫升去離子水，加熱以除去多余的硝酸。待燒杯中的液體接近2～3mL時(shí)，取下冷卻。用去離子水洗并轉(zhuǎn)移于10mL刻度試管中，加去離子水定容至刻度(測(cè)鈣時(shí)用2%氧化鑭溶液稀釋定容)。
取與消化樣品相同量的混合酸消化液，按上述操作做試劑空白試驗(yàn)測(cè)定。
5.2 測(cè)定
將鈣、標(biāo)準(zhǔn)使用液分別配制不同濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，見表2，測(cè)定操作參數(shù)見表3。
表2 不同濃度系列標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的配制方法
�。▓D略）
表3 測(cè)定操作參數(shù)
（圖略）
其他實(shí)驗(yàn)條件：儀器狹縫、空氣及乙快的流量、燈頭高度、元素?zé)綦娏鞯染词褂玫膬x器說明調(diào)至最佳狀態(tài)。
將消化好的樣液、試劑空白液和各元素的標(biāo)準(zhǔn)濃度系列分別導(dǎo)入火焰進(jìn)行測(cè)定。
5.3 計(jì)算
5.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線法
以各濃度系列標(biāo)準(zhǔn)溶液與對(duì)應(yīng)的吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。鈣標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。它的線性相關(guān)系數(shù)為0.9996。
�。▓D略）
測(cè)定用樣品液及試劑空白液由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出濃度值(c及c0，再按式(1)計(jì)算。
式中：X——樣品中元素的含量，同mg/100g；
c——測(cè)定用樣品中元素的濃度(由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出)，μg/mL；
c0——試劑空白液中元素的濃度(由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出)，μg/mL；
V——樣品定容體積，mL；
f——稀釋倍數(shù)；
m——樣品質(zhì)量，g；
�。▓D略）
5.3.2 回歸方程法
由各元素標(biāo)準(zhǔn)稀釋液濃度與對(duì)應(yīng)的吸光度計(jì)算出回歸方程(也可以輸入計(jì)算器得出回歸方程)，計(jì)算見式(2)。
c＝ay＋b……………………………………………(2)
式中：c——測(cè)定用樣品中元素的濃度(可由計(jì)算器直接得出，μg/mL)；
a——曲線斜率；
y——元素的吸收度；
b——曲線的截距。
由回歸方程或計(jì)算器得出測(cè)定樣液及試劑空白液的濃度后，再由式(3)計(jì)算。
式中各字母的含義同曲線法說明。
5.3.3 結(jié)果的重復(fù)性
同實(shí)驗(yàn)室平行測(cè)定或連續(xù)兩次測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性鈣小于10%。
最低檢測(cè)限：鈣0.1μg。
第二篇 滴定法(EDTA法)
6 原理
鈣與氨羧絡(luò)合劑能定量地形成金屬絡(luò)合物，其穩(wěn)定性較鈣與指示劑所形成的絡(luò)合物為強(qiáng)。在適當(dāng)?shù)膒H值范圍內(nèi)，以氨羧絡(luò)合劑EDTA滴定，在達(dá)到當(dāng)量點(diǎn)時(shí)，EDTA就自指示劑絡(luò)合物中奪取鈣離子，使溶液呈現(xiàn)游離指示劑的顏色(終點(diǎn))。根據(jù)EDTA絡(luò)合劑用量，可計(jì)算鈣的含量。
7 試劑
要求使用去離子水，優(yōu)級(jí)純?cè)噭?
7.1 1.25mol/L氫氧化鉀溶液：精確稱取71.13g氫氧化鉀，用去離子水稀釋至1000mL。
7.2 1%氰化鈉溶液：稱取1.0g氰化鈉，用去離子水稀釋至100mL。
7.3 0.05mol/L檸檬酸鈉溶液：稱取14.7g檸檬酸鈉(Na3C6H5O7·2H2O)，用去離子水稀釋至1000mL。
7.4 混合酸消化液：硝酸(GB 626)與高氯酸(GB 623)比為4∶1。
7.5 EDTA溶液：精確稱取4.50g EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)，用去離子水稀釋至1000mL，貯存于聚乙烯瓶中，4℃保存。使用時(shí)稀釋10倍即可。
7.6 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取0.1248g碳酸鈣(純度大于99.99%，105～110℃烘干2h)，加20mL去離子水及3mL 0.5mol/L鹽酸溶解，移入500mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，貯存于聚乙烯瓶中，4℃保存。此溶液每毫升相當(dāng)于100μg鈣。
7.7 鈣紅指示劑：稱取0.1g鈣紅指示劑(C21O7N2SH14)，用去離子水稀釋至100mL，溶解后即可使用。貯存干冰箱中可保持一個(gè)半月以上。
8 儀器與設(shè)備
所有玻璃儀器均以硫酸－重鉻酸鉀洗液浸泡數(shù)小時(shí)，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反復(fù)沖洗，最后用去離子水沖洗曬干或烘干，方可使用。
8.1 實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器：高型燒杯(250mL)，微量滴定管(1或2mL)，堿式滴定管(50mL)，刻度吸管(0.5～1mL)，試管等。
8.2 電熱板：1000～3000W，消化樣品用。
9 樣品制備
同第一篇。
10 操作步驟
10.1 樣品消化
同第一篇。
10.2 測(cè)定
10.2.1 標(biāo)定EDTA濃度
吸取0.5mL鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液，以EDTA滴定，標(biāo)定其EDTA的濃度，根據(jù)滴定結(jié)果計(jì)算出每毫升EDTA相當(dāng)于鈣的毫克數(shù)，即滴定度(T)。
10.2.2 樣品及空白滴定
吸取0.1～0.5mL(根據(jù)鈣的含量而定)樣品消化液及空白于試管中，加1滴氰化鈉溶液和0.1mL檸檬酸鈉溶液，用滴定管加1.5mL 1.25mol/L氫氧化鉀溶液，加3滴鈣紅指示劑，立即以稀釋10倍EDTA溶液滴定，至指示劑由紫紅色變藍(lán)為止。
10.3 計(jì)算
樣品中該元素的含量按式(4)計(jì)算：
式中：X——樣品中元素含量，mg/100g；
T——EDTA滴定度，mg/mL；
V——滴定樣品時(shí)所用EDTA量，mL；
V0——滴定空白時(shí)所用EDTA量，mL；
f——樣品稀釋倍數(shù)；
m——樣品稱重量，g。
11 結(jié)果的重復(fù)性
同實(shí)驗(yàn)室平行測(cè)定或連續(xù)兩次測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性小于10%。
本方法的檢測(cè)范圍：5～50μg。
業(yè)務(wù)：